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高压氧下顺铂对裸鼠移植大肠癌模型的作用
湖南医大附一院外科* 李定明 晏仲舒
张时绥
湖南医大附一院高压氧科 李严祥
朱双罗 关钟琪
摘要 实体瘤中乏氧细胞的存在，可能是其对某些化疗药物不迁感的原因[1]，本实验大鼠移植人大肠高分化腺癌第3代肿瘤模型在高压氧（HBO）下进行顺铂（CDDP）化疗、通常条件下化疗及单纯高压氧处理。通过肿瘤体积和重量测量，5－溴脱氧尿苷（Brdu）标记指数[2]及光镜组织学规定结果表明：HBO下应用CDDP使移植瘤生长明显受到抑制，提示HBO对CDDP有样敏作用，同时本实验未发现HBO有促进大肠癌转移的倾向。
关键词 裸鼠移植大肠癌
顺铂化疗 高压氧
实体瘤在生长过程中，随着体积的增大；血管的形成往往跟不上肿瘤生长的需要。肿瘤细胞的氧及营养物质供应随其与血管的距离增大而减少。增殖期瘤细胞转入静止期或变性坏死、乏氧细胞的存在可能是放疗、化疗治疗后复发的主要原因。高压氧下对某些肿瘤放射和光动力学治疗已取得一定效果。本实验研究的目的在于探讨高压氧是否有促肿瘤增殖效应及能否增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。
材料与方法
材料：大肠癌病人手术切除的新鲜标本，RPMI 1640，小牛血清（湖南医大国家临床药理培训中心赠）BALB／cNu／Nu4～6周龄雄性裸鼠如京医科院京动字号第9009M045），体重20～28g，顺铂（CDDP）（济南齐鲁制药厂10mg／支，批号900203），5－溴脱氧尿苷（Brdu，Sigma），抗－Brdu单抗（美国罗斯福医学研究所Mayers教授赠）。
方法：l．异体移植
（l）手术切除，经病理诊断为大肠高分化腺癌之肿块，取其肉眼无坏死区，在0.05％Cephaloricine（先锋V号）生理盐水中漂洗 4次。制成约1mm3小块浸浴在含20%小牛血清中的RPMI 1640液中备用。
（2）非麻醉状态下，于裸鼠左腹股沟皮下植入1mm3之肿瘤组织。然后在消毒无菌条件下，标准饲料喂养。
2．肿瘤传代
（l）取生长40天的第1代肿瘤。在含20％小牛血清的RPMI 1640液中去坏死组织并制成1mm3之小块，快速病理切片证实为大肠高分化腺癌后，分别植入两只裸鼠的双侧腹股沟皮下（左2块，右1块）。
（2）取第2代生长30天之肿瘤快速病理切片，病理形态未变。按上述方法在另两只裸鼠颈部皮下分别植入6mm3和2mm3肿瘤组织。
3．实验瘤的形成
（l）取生长30天的第3代肿瘤、病理检查：大肠高分化腺癌。
（2）肿块置含20％小牛血清的RPMI 1640液中，剪碎后经纱布过滤，离心后去上清液。
（3）取离心后的细胞是液，用排斥法计数肿瘤细胞数。用含20％小牛血清的RPMI1640液稀释并配成2×106／ml细胞悬液。
（4）非麻醉状态下，于每只裸鼠有颈部皮下分别注射0.5ml细胞悬液共20只。
（5）观察裸鼠及肿瘤的生长情况，当肿瘤长出后开始测量其肿瘤大小，每3天测量1次，根据公式V=π／6·X3（测定3次直径的平均值）。计算肿瘤体体积（V），按照平均体积绘制生长曲线。
（6）52天后将长出肿瘤的裸鼠随机分成：A组全空白对照；B组HBO加生理盐水（实验对照）；C组CDDP（实验对照）；D组CDDP加HBO（实验组）。
（7）53天后开始进行HBO，压力为0.25Mpa（2.5ATA），每次吸纯氧80分钟，每天1次，连续9天。
①入舱前10分钟，B组腹腔内注射生理盐水0.5ml／只。C组与D组腹腔内注射CDDP 2.5mg／kg／只。
②高压氧完成后，让体内残留药物继续起效3天，并观察裸鼠生长情况。
③处死裸鼠前15小时腹腔内注射Brdll 50g／kg／只，进行肿瘤体内标记。
④处死裸鼠，完整分离出皮下肿瘤，用游标卡尺测量肿瘤3个不同直径，计算其体积，并用分析天平测量其重量（W）。肿瘤的1／2用于测量标记指数，另1／2行常规病理检查，同时观察裸鼠肝、肺、肾有无肿瘤转移灶。
4．标记指数测定
标记指数的测定按胡氏[2]介绍的方法进行。被标记的S期细胞核呈均匀红染，未标记的核呈兰染，用单盲法在光镜下计数1000个细胞，记录总细胞数和被标记细胞数，标计指数（LI）按下列公式计算：
LI－BrdU标记阳细胞数／总细胞数×100％
5．资料分析
用q检验对实验数据进行统计学分析。
 
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