高压氧治疗急性一氧化碳中毒大鼠脑内酶的组织化学动态研究

北京军区总医院高压氧室*

李亚平  周伟  侯艳丽  陈国  孟昭如  黄克显  刘家文

摘要    我们观察了高压氧（HBO）治疗急性一氧化碳（CO）中毒大鼠脑亚细胞内酶的组织化学动态变化，酸性磷酸酶（AcP）和琥珀酸脱氢酶（SDH）在脑组织切片上的染色强度经细胞显微分光光度计分析，看到：单纯染毒组脑神经细胞AcP的OD值0.32～0.47，治疗组OD值0.4～0.52，P＜0.01。单纯染毒组脑室脉络丛内皮细胞SDH的OD值是0.14～0.4,HBO治疗组是0.14～0.47，P＜0.01。正常饲养对照组AcP的OD值0.69±0.08，SDH的OD值是0.48±0.05。染毒后8h降至最低。

HBO治疗CO中毒可增强脑神经细胞的自我保护能力并能提高受损伤的细胞内线粒体的可逆性转变。如果CO中毒后8h之内经2次HBO治疗并不能改善脑细胞的缺氧状况，最好是在3天内做7次HBO治疗。

关键词    高压氧    酸性磷酸酶    琥珀酸脱氢酶

    一氧化碳（CO）中毒是生产和生活中常见的现象。中毒后机体最敏感的组织中枢神经和心血管系统受到损害。损伤的机制是组织缺氧而引起整个机体的一系列生理变化，从而导致病理和生物化学的改变。本研究是对CO中毒后大鼠脑神经细胞的亚细胞内三种酶进行动态观察，探讨CO中毒后脑缺氧而出现的损伤程度与时相的相关性，及高压氧（HBO）治疗后，脑细胞在恢复其生理功能的过程中所显示出酶活性的改变。

材料和方法

      1．CO气：纯度99.99％，由科学院劳卫所提供。

      2．动物：雌性健康大鼠85只。体重250g左右，本院动物室提供。

      3．染毒方式：静式吸入染毒。自制密闭染毒柜0.5立方米。每批10只大鼠同时染毒持续80分钟。采用北京市朝阳区北苑检测分析仪器厂提供的CO快速测管采样50ml进行测定，染毒过程共测定4次，柜内浓度维持在3500～4000mg／m³。

    4．动物分组：

      5．正常饲养对照5只。

      6．HBO治疗方法：压力2ATA吸氧60分钟，中间休息10分钟。

      7．测定碳氢血红蛋白：方法为一氧化碳血红蛋白定性试验

      8．标本处理：断头处死动物、立即解剖取脑；放入液氮（-196℃），恒冷箱冰冻切片，4μm连续冠状取材，电扇吹干，组织化学染色。

附表    两组情况

  * 括号内为HBO治疗次数

9．组化染色：（l）酸性磷酸酶（ACP Gomori 1950），（2）琥珀酸脱氢酶（SDH Peason 1985），（3）碱性磷酸酶（AKP　Butcher 1966）^[2]。

10．组化染色片细胞分光光度分析：分析仪系OPTON公司IBAS－2000系列全自动交互式图像分析仪，物镜6.3X，绿色滤光片，利用维彩色像进行分析，测定大鼠脑基底神经节神经细胞AcP的标志物硫化铅棕色沉淀的吸收光值（OD）值，及大鼠脑室脉络丛内皮细胞标志SDH活性的篮色甲月替 颗粒的吸收光值。OD值进行t检验及F检验统计分析。

      11．AKP及SDH以盲法肉眼判定着染强底。SDH以甲月替 蓝色颗粒着染。AKP以硫化钻黑色着染，分别按顺序以+～++++个加号记录，最后做相关检验。

结果

一、大鼠CO中毒的临床症状：染毒开始，动物活泼，继而躁动，20分钟后竖毛，呼吸急促，40分钟后四肢瘫软，60～80分钟部分动物出现昏迷，呼吸减慢，判断昏迷的指标为将动物仰角5秒钟不能自主翻身。其余动物呼吸减慢。出箱后强刺激他勉强匍匐爬行。共昏迷21只，死亡20只。

    二、血中碳氧血红蛋白测定。染毒后碳氧血红蛋白阳性，正常对照为阴性。

三、酸性磷酸酶OD值分析：AcP的硫化铅沉演于神经细胞胞浆及轴突、树突，胞核无着染。结果见表一：

表1    大鼠脑基底神经节神经细胞AcP OD值Ⅰ组与Ⅱ组各时相结果

  t  0.01=2.59

   各时相HBO治疗组明显高于未治疗组，染毒后8h，AcP活性最低，随时间延长逐步上升，48h、72h以后来治疗组有下降趋势，治疗组明显升高。各组昏迷大鼠与未昏迷大鼠AcP OD值无差别，T值0.3，P＞0.05。正常大鼠 AcP OD值为0.69±0.08，与两大组各时相进行F检验。I组F221，Ⅱ组F值764，P＜0.01，两组各时相明显低于正常饲养鼠。

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