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高压氧对急性脑缺血家兔大脑代谢酶及环核苷酸作用的研究
中国人民解放军航海病医学专科中心* 四○一医院高压氧科
邱亚西
杨安全 高光凯
腾燕生 聂翠艳
易仁元 孙秀梅
提要
在52只家兔以闭塞双侧颈总动脉法复制急性不完全性脑缺血动物模型，观察脑缺血20分钟后不同时间（20分钟、40分钟、120分钟）再灌流大脑皮层代谢酶（乳酸脱氢酶、异柠檬酸脱氧酶、细胞色素氧化酶、线粒体三磷酸腺苷酶）活性及脑细胞病理改变以及大脑皮层组织环核苷酸含量的变化。以高压氧组、高气压组与对照组相比较。实验结果表明：（l）高压氧使实验家兔上述四种代谢酶活性增强。（2）高压氧对实验家兔脑皮质环核苷酸含量无明显影响。（3）病理切片显示高压氧治疗组家兔脑组织损害减轻。本文旨在探讨高压氧对急性脑缺血重灌流脑损伤的作用机理，为临床应用高压氧治疗急性缺血性脑病提供理论依据。
关键词 高压氧
脑缺血 重灌流
乳酸脱氢酶 异柠檬酸脱氨酶
细胞色素氧化酶
线粒体三磷酸腺苷酶
环核苷酸
脑复苏目前已经成为国内外医学研究的重要课题之一随着对急性缺血性脑病的深入研究，应用高压氧（HBO）治疗缺血性脑损伤，已经引起医学界的广为重视。有关的实验研究认为：脑缺血后的生化代谢紊乱是影响神经细胞转归的一个重要因素。本研究课题从影响糖代谢及能量代谢的酶入手，利用光镜组织化学方法，观察HBO对急性脑缺血重灌流家兔脑皮质代谢酶的活性变化及病理改变的影响，以及对脑组织环核苷酸含量的影响，探讨HBO治疗急性脑缺血的作用机理。
材料和方法
一、实验动物：使用军事医学科学院动物中心提供的日本大耳白家兔52只，性别不拘，体重2.3－3Kg，随机分成HBO组（n=18），高气压（HBA）组（n=17），对照组（n=17）。每组动物又根据重灌流时间不同分为20分钟组，40分钟组，120分钟组。
二、制作急性不完全性脑缺血动物模型：随机确定实验顺序。用20％乌拉担（1g／Kg）耳缘静脉注射麻醉动物，手术分离双侧颈总动脉、颈；内静脉和右股动脉。右股动脉插管固定，通过三通管联接血压计以监测血压，并作放血、输血之用。打开三通管放血至平均动脉压（MABP）为5.33kPa，然后用动脉夹阻断双侧颈总动脉，即为脑缺血开始期间，维持MABP为 5.33土0.65kPa持续保持脑组织低压、低灌流的缺血状态。20分钟后移去双侧动脉夹，回输血液至MABP为13.33kPa，重灌流开始。
HBO组：在0.25MPa高压舱内，面罩呼吸99.8％氧气，加压时间5分钟，减压时间15分钟。
HBA组：置于同一舱内，面罩呼吸氮一氧混合气（8.4％O2，91.6％N2）。
对照组：置于常压舱内呼吸空气。
各组家兔分为三批，分别在上述重灌流20分钟、40分钟、120分钟后，切断双侧股动脉快速放血，活体开颅取大脑皮层组织块，放入液氮（－196℃）中冰冻，以备检测。
三、对大脑皮质四种代谢酶进行组织化学染色：取各组标本置同一切片台上，用OTF／AS冰柜式冷冻切片机（英国BRIGHT）作恒冷切片，温度一40℃，切片厚度8μm，切片固定。酶染处理条件相同，分别进行乳酸脱氢酶（LDH）、异柠檬酸脱氢酶（ICDH）、细胞色素氧化酶（cyta．a3）、线粒体三磷酸腺苷酶（ATPase）活性测定，各组酶组化均设去对照片以排除假阳性，并以去底物对照片酶反应的阴性定为0级，以此类推把各种酶反应活性依其颗粒密度分为十、＋＋、＋＋＋、十十十十级[1]，用光镜检查（※1000）。同时做HE常规制片，观察其神经元及胶质细胞改变。
四、大脑皮层组织环核苷酸含量测定：使用中国原子能研究所提供的环核苷酸放射免疫分析药盒，按说明书方法，处理脑组织标本，用2107液体闪烁计数器测定cAMP含量。
 
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