|
各组动物逐个进舱，常压空气组动物在舱内以空气持续通风25min；为避免缺氧，近似常氧氮组先用空气加压，待舱压升至600KPa（总压）后，再用含氧4％的氮氧混合气更换空气，25min后；又将舱内呼吸介质换成空气，随即开始减压；对高压氧未惊厥和惊厥组，加压前先用纯氧通风
5 min，然后再以纯氧将舱压升至加600KPa（总压），未惊厥组高压下停满15min开始减压，惊厥组则停至惊厥大发作（20士11min，X士S）才开始减压。高压下停留期间各组分别供相应的加压用气持续通风，以降低舱内CO2，通风量5L／min，各组加压速度均为25OKPa／min，减压速度为100KPa／min。环境参数详见表1。
表1
总组舱内环境参数
|
组别
|
气体
|
舱内总压（kpa）
|
Po2（kpa）
|
Pco2（kpa）
|
T（℃）
|
|
常压空气组
|
air
|
100
|
21
|
＜1.2
|
20±2
|
|
近似常氧氮组
|
N2-O2
|
600
|
24
|
＜1.2
|
20±2
|
|
高压氧未惊厥组
|
O2
|
600
|
≧570
|
＜1.2
|
20±2
|
|
高压氧惊厥组
|
O2
|
600
|
≧570
|
＜1.2
|
20±2
|
动物出舱后立即断头，2min内取出全脑，投入沸生理盐水中煮5min，取出后用滤纸吸干。沿脑正中线作矢状切面，分别再分离出纹状体和下丘脑，称重后各胞区分别放入0.1N的冰醋酸lml的匀浆器中制成匀浆，1小时后加入0.1N的氢氧化钠1ml，离心，3000rpm，20min,取出上清置于一20℃以下低温保存待测。
3．L－Enk的测定：
测定时下丘脑取上清150μl。加PELH缓冲液[6]150μ1；纹状体取上清300μ1，分别移入聚苯乙烯放免测定管内，再加入1：1600抗血清100μl，最后加入125I标记r L－Enkl00μI(内含7000
CPM)，使总反应体积为500μ1，抗血清最终浓度为 l：8000。在
4℃孵育24小时后，用单道r能谱仪测出反应总体积内的CPM，然后每管内再加入加胰活性炭溶液300P！，离心，3500rpm，10mEn，弃上清，再用单道r能谱仪测沉淀物中的CPM；用反应总体积内的CPM减去第二次测得的沉淀物的CPM，计算出
B／Bo百分值，从同批实验所作的标准曲线上找出相应值，经换算得出不同脑区每毫克湿重脑组织内L－Enk含量微微克。
|
