|
高压氧在小鼠Lewis肺癌化学治疗中的作用
第二军医大学海军医学系
练庆林 杭荣椿 倪国坛
华东理工大学
陈涛
摘要
目的：探讨高压氧（HBO）对荷Lewis肺癌小鼠在化学治疗中的增效作用及其机理。方法：270只荷Lewis肺癌的C57小鼠被随机等分为空气对照组、高压常氧氮组、HBO组、HBO－丝裂霉毒组、HBO－环磷酰胺组、HBO－SOD组、丝裂霉素组、环磷酰胺组和SOD组共9个组。对Lewis肺癌组织中的氧自由基（OFR）含量，并且应用分光光度法测定其脂质过氧化物丙二醛（MDA）的含量，同时对各组动物荷瘤的体积、重量、坏死率及小鼠致死率进行了观察。结果：HBO组、HBO－丝裂霉素组及HBO－环磷酰胺组的动物与相应的对照组相比，肺癌组织中的OFR含量和MDA含量均显著增高（P＜0.05～0.001）；荷瘤组织坏死率高，且坏死所需时间短；动物存活率高；肿瘤体积和重量也显著小于对照组（P＜0.05～0.001）。结论：荷Lewis肺癌小鼠经HBO暴露可以减缓荷瘤生长速度并加速小鼠Lewis肺癌细胞的坏死，丝裂霉素或环磷酰胺结合HBO治疗荷Lewis肺癌小鼠，能显著增强药物的抗肿瘤效应，减轻其副作用和延长小鼠的生命。
关键词
高压氧
氧自由基
肿瘤－Lewis肺癌
本研究从自由基生物学和自由基理论出发，对荷Lewis肺癌小鼠进行化疗结合高压愧疚（HBO）治疗，通过检测荷瘤组织中的氧自由基（OFR）和丙二醛（MDA）含量，并对各组动物肿瘤的体积、重量、溃破率及小鼠的致死率进行了观察、分析，从中探讨HBO在化学治疗中对小鼠Lewis肺癌组织中的OFR含量的影响及其可能的机理。
材料与方法
一、动物与肿瘤
实验动物为体重在1723g的C57纯种小鼠270只，雌雄各半；Lewis肺癌瘤源取生长10天左右荷瘤动物，脱颈椎处死常规消毒，后取出肿瘤，在无菌条件下用生理盐水以1：4匀浆制成细胞悬液，于每只小鼠右腋皮下接种0.2ml。
将经上述处理的动物随机等分为空气对照组（air
control）、高压氧常氧氮组（N2－O2）组、HBO组、HBO－丝裂霉素（HBO－M组）、丝裂霉素（M）组、环磷酰胺（C）组和SOD组。
二、加压前准备
对Lewis肺癌小鼠使用化学治疗结合HBO疗法，每次动物进舱前15min，HBO－SOD组和SOD组对小鼠腹腔内注射SOD100000IU/kg；HBO－M组和M组分别每次腹腔注入丝裂霉素0.4mg/kg，隔日1次，共计10次。空气对照组、N2－O2组和HBO组动物则在相应时间内分别腹腔注入等容积生理盐水。
三、高气压暴露过程
各组动物分批进舱，空气对照组动物进舱后，在常压下以5L/min的速率通风并停留90min出舱；其余各组暴露压力时程为250kPa（绝对压），90min/次；1次/日，每周连续暴露6次，共暴露3周。高压常氧氮组动物暴露在含氧10%的氮氧混合氧中；HBO组、HBO－M组、HBO－C组、HBO－SOD组动物分别暴露在高压氧下；M组、C组和SOD动物则分别暴露在常压空气中。舱内暴露时间，各组动物分别用加压气体通风，通风量为5L/min。各组加压速度均为100kPa/min，减压以10min缓慢减至常压。
四、自由基测定
采用PBN自旋捕捉剂法，自由基捕捉剂购自Sigma公司。在研磨器中加入100mmol/L PBN（N－特丁基－α－苯基硝酸灵）环已烷溶剂1ml。以脱颈椎处死小鼠，迅速取出100mg肉瘤组织投入其中并研碎，倒入离心管中离心2000rpm、1min，取上清液150μl，注入直径3mm石英玻璃管中，置于液氮下待测。自由基的ESR测定使用Bruker公司的ER200－SRC型电子顺磁共振仪；室温下记录ESR波谱。测试条件：微波功率20mW，调制幅度0.2mT，调制频率100KHz，时间常数为500ms，增益5×10，中心场343mT，扫描宽度10mt，扫描时间100s，用频率计和NMR高斯计准确测定微波频率和磁场，用Aspect2000计算机处理数据。
五、脂质过氧化物测定
参照Hirosh方法[1]。
1．采用分光光度法测定样本中的MDA含量。
2．计算与统计 每批实验做一标准MDA工作曲线，以标准MDA含量为横座标，OD为纵座标求得回归方程，再根据样品OD523值计算MDA含量，各组之间采用团体小样本检验法进行统计学处理。
六、从治疗开始每3天测肿瘤体积1次，观察各组动物肿瘤体积的变化，最后测定其重量，同时记录肿瘤的溃破率和各组小鼠致死率。
 
|
