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高压氧对正常大鼠一氧化氮及磷酸肌酸激酶的影响
烟台市毓璜顶人民医院* 宋修兰
山西省五建卫生科**
王嘉兰
首都医科大学附属北京红十字朝阳医院*** 葛环
摘要 探讨0.2MPa高压氧对正常组织一氧化氮（NO）系统和磷酸肌酸激酶（CK－BB）的影响。实验用Wistar大鼠36只,随机分成对照组、高压氧处理后第1、3、5、10、20天组。分别于高压氧处理后立即、第3、5、10、20天测定大鼠海马钙离子（［Ca2+］i）、NO、环磷酸鸟苷（cGMP）及血清磷酸肌酸激酶（CK-BB）浓度。实验结果提示：0.2MPa高压氧处理20天未见其引起NO系统报伤和脑损伤所致的血清酶学的改变。
关键词 高压氧 一氧化氮 磷酸肌酸激酶
高压氧（HBO）对正常组织的影响历来是高压氧医学界十分关注的课题。NO是一种普通的气体物质，具有广泛而独特的生物作用，如舒张血管、抑制血小板凝聚、细胞毒性、参与神经内分泌活动等。对它的研究已成为国际上研究的热点。我们曾报告了高压氧对一氧化碳中毒大鼠
NO系统的影响[1]，但尚未见高压氧对正常组织NO影响的报告。本课题动态观察了正常大鼠在0.2MPa高压氧环境下NO系统和磷酸肌酸激酶（GK－BB）的变化。以便于我们进一步研究高压氧对正常组织的影响。
资料与方法
实验动物及分组 健康成年Wistar大鼠共36只，雌雄不拘，体重200～250g，购自首都医科大学实验动物室。动物被随机分成6组。正常对照组6只，高压氧处理后第l、3、5、10、20天组各6只。
一、实验动物的高压氧处理 实验动物按高压氧处理后第l、3、5、10、20天组分期分别放入80×45×40mm的特制木箱中进行高压氧处理。箱子一侧接输氧管，进气口测氧浓度为99.8%，另一侧有10个直径6mm的出气口。高压氧处理采用高气压空气舱，升压30min，升压至0.2MPa后稳压给氧60min,减压40min。给氧4min后大鼠开始活跃。给氧60min大鼠均亢奋，减压时大鼠开始恢复平静，无抽搐和死亡。
二、检测项目 于高压氧处理后立即、第3天、5天、10天、20天对以下项目进行检测：
1．大鼠海马神经原内[Ca2+]i水平测定 (1)制备细胞悬浮液：取海马组织50mg左右，尽量切碎，置于0.33mg/ml胶原酶A的PBS溶液中，37℃消化30min，调样本细胞浓度为106/ml。（2）配制Fluo－3AM储备液。用无水DMSO配制20％的Pluronic-127溶液，再用上述溶液配制2mmol的Fluo-3AM储存液。置-20℃的环境保存。（3）用PBS将Fluo－3AM储备液稀释
1000倍，使之与细胞悬浮液等体积混合，置37℃环境下避光孵育30min，用PBS洗2次。（4）上机检测，计算样本的荧光指数。流式细胞仪是FACSCalibur
BD公司产品，采用激光波长为530nm。Fluo-3,AM后 ester和 Pluronic-127购自美国BioTeam
Laboratories 公司。胶原酶 A为Sigma公司产品。
2．大鼠血浆NO测定 乙醚麻醉大鼠，迅速从心脏抽血2ml，离心（2000r/min）15min，使用军事医学科学院放射医学所提供的NO试剂盒。用日本产岛律UV－120-02型分光光度仪，采用分光光度法检测血浆NO浓度。
3.大鼠海马裤经原cGMP测定 剪开颅骨，在0－4℃下迅速取出双侧海马，称取组织50mg左右放入盛有2ml冷的50mmol/L醋酸缓冲液的试管中，用匀浆器组织粉碎匀浆。离心（3500r/min）15min，收集上清液后，再用75％乙醇1ml洗匀浆器连续两次，用该2ml75%乙醇洗沉淀，混匀，离心，
3500r/min 15min。合并上清液，60℃水浴中吹干。测定时用50mmol/L醋酸缓冲液稀释，取50ul用放免法测定cGMP含量。cGMP放免试剂盒购自上海中医药大学同位素室。
4．统计学处理与对照组两样本均数比较采用t检验，组间比较采用F＋q检验。
 
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