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高压氧对一氧化碳中毒时线粒体膜
电位与细胞凋亡的影响
首都医科大学附属北京红十字朝阳医院* 高压氧科 高春锦 夏成清
武连华
北京积水潭医院**
曹 珊
北京公安医院***
王 莉
摘要 目的：观察动物一氧化碳中毒（COP）后海马神经细胞缺血损伤时线粒体膜电位及细胞调亡数量的变化以及高压氧（HBO）对其影响。方法：Wistar大鼠共128只随机分成16组。正常对照组8只，COP后（CO）第1、5、10、15、20天组各8只，高气压处理后（CP）第1、2、10、15、20天组各8只，高压氧处理后（CH）第1、5、10、15、20天组各8只。用流式细胞仪测定大鼠COP后不同时间段海马神经元线粒体膜电位及凋亡细胞相对百分比的变化和高压氧治疗后的改变。结果：COP后CO组大鼠线粒体膜电位在第1、5、10天降低（P＜0.01）（P＜0.05）；CH组在第1、5降低（P＜0.01）（P＜0.05）。COP后CO组大鼠大鼠海马神经原凋亡细胞相对百分比在第1、5、10、15、20天均高于对照组（P＜0.01）；而CH组在第1、5、10天高于对照组（P＜0.01）。结论：COP后大鼠海马神经原线粒体膜电位降低，凋亡细胞数增加，并持续很长时间。高压氧治疗加速线粒体膜电位恢复，减少凋亡细胞数量。
关键词：高压氧 一氧化碳中毒
线粒体膜电位 细胞凋亡
细胞凋亡是细胞死亡的一种方式，它在维持生物机体细胞增值与死亡的平衡过程中起着重要作用。细胞凋亡受多种外界环境因素的影响。而线粒体膜电位的稳定性对于维持细胞的存活又是至关重要的。实验表明，病理条件下，当缺血发生引起组织损伤时，凋亡也同时发生。本研究通过对大鼠COP后不同时期线粒体膜电位和凋亡细胞的变化，探讨高压氧的作用。
材料与方法
1．实验动物及分组 健康成年Wistar大鼠共128只，雌雄不拘，体重200~250g。动物被随机分成16组。正常对照组8只，COP后第1、5、10、15、20天组各8只，高气压处理后第1、5、10、15、20组各8只。
2．一氧化碳中毒动物模型制作 向直径47.2cm，高56cm密闭染毒罐中注入99.8%CO气265ml。分组将大鼠放入染毒罐中，静式吸入含CO的空气60min，其间用检测仪测定罐内CO浓度3次，其浓度为3378.32mg／L。染毒开始，动物表现活跃，5~6min后开始躁动，8min后出罐。出罐后30min大鼠苏醒但精神萎靡，1~2h后在外观上与对照组无明显差别。对照组未吸一氧化碳亦未行高压氧处理。
3．实验动物的高压氧处理 实验动物按第1、5、10、15及20天组分别放入80×40cm的特制木箱中进行高压氧处理。箱子一侧接输氧管，另一侧有10个直径6mm的出气口，给氧10min后在出气口测定氧浓度为99.8%。高压氧处理采用高气压空气舱，升压25min压力升至0.2MPa后稳压60min稳压时给氧，减压40min。给氧40min后大鼠开始活跃，给氧60min大鼠均亢奋，减压时大鼠开始恢复平静，无抽搐和死亡。高气压组仅行高气压处理，在舱中不吸氧。
4．检测项目
（1）大鼠海马神经细胞线粒体膜电位测定：取海马组织，制备成单个细胞悬液，调节细胞浓度为106／ml，加入Radmine123储备液使之终浓度为10μm。在37℃避光孵育60min，PBS洗两次，上机检测。用荧光指数表示线粒体膜电位。
（2）大鼠海马神经元凋亡细胞相对百分比测定：取海马组织制备单个细胞悬液，调节细胞浓度为106／ml，用Annexin V及PI对神经细胞进行双标记，记录Annesin V阳性PI阴性细胞数的百分比，即早期凋亡细胞。
5．统计学处理 与对照组两独立样本比较采用t检验，各组间比较采用方差分析。
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