高压氧对正常大鼠肝细胞凋亡影响的实验研究
首都医科大学附属北京红十字朝阳医院*动物室 郭晓秋
北京市通州区潞河医院**普外科
姚成礼
摘要
目的：观察高压氧对正常大鼠肝细胞凋亡的影响，借以探讨高压氧对正常肝细胞的不良作用。方法：将24只Wistar大鼠随机分为高压氧3天组、7天组和对照3大组、7天组。高压氧两组大鼠进行高压氧处置每天1次。于高压氧第3天和第7天与对照组同时处死，分别测定肝细胞凋亡指数（AI）。结果：高压氧3天组与对照组相比，无显著性差异（P＞0.01）高压氧7天组的AI明显高于对照组P＜0.01，有非常显著性差异。结论：高压氧和促进正常大鼠肝细胞凋亡。
关键词：高压氧 凋亡肝细胞
高压氧在临床上具有广泛的用途，几乎涉及临床所有的学科，对一些疾病的治疗具有明显疗效。但高压氧也具有副作用，高压氧可增加体内的氧自由基，但是否由此而对人体有害，尚有争议。本研究通过测定肝细胞凋亡来判定高压氧细胞有无不良作用。现报道如下。
材料与方法
1．实验动物
雌性Wistar大鼠24只，体重约220～250g，鼠龄70～80天，（购自首都医科大学实验动物中心）
2．实验动物分组
将24只大鼠随机分成高压氧3天和7天组，对照3天组和7天组，每组6只。对照组动物室内与高压氧组大鼠同时饲养于高压氧处置于第3次和第7次舱后，两组动物同时处死。
3．实验处理
实验组大鼠进行高压氧处置，采用单人纯氧舱，压力为 0.2MPa，以纯氧升压 20min，稳压50min，减压20min；（升压时洗舱2次），每日1次，共7次。
4．主要试剂和仪器
1．程序性细胞死亡检测剂盒（华美生物技术公司提供）
2．高压氧舱
使用3舱7门高压氧舱群，大鼠放入底部设有筛状通气孔，容积为60×40×20cm3的箱中。
5．标本采集
大鼠经断颈处死后，取肝尾叶小块组织经10％福尔马林固定，石蜡包埋。作厚5μm的组织切片。
6．凋亡细胞检测
由于凋亡细胞内的内源性核酸内切酶被激活，细胞自身的DNA被切割，并产生与DNA断点数目相同的3ˊ-羟基本末端。末端脱氧核糖核酸转移酶（TdT）可以将生物素化的dUTP（Bi ot –in –ll –Dutp）标记至3ˊ羟基末端，该生物素可以通过与亲合素的特异结合使亲合素一辣根过氧化物酶（Avid in－HRP）结合在DNA断点部位，加入HRP显色底物后在原位出现有色沉淀，从而可以在显微镜下观察到被着色的凋亡细胞。肝组织切片经DNA原位末端标记后，在光镜下随机检测10000个肝细胞内有凋亡肝细胞数目；并计算平均每100个肝细胞中凋亡肝细胞数即为肝细胞凋亡指数。
7．统计学处理
为前瞻性研究，采用单纯随机抽样（随机数字表法）。所得数据为计量资料，以均数±标准差（
）表示，采用两两比较的t检验。由SYSTAT统计软件包来实现。
结 果
如表1所示，高压氧对正常鼠肝细胞凋亡的影响，在 3d时与正常对照组无明显差异P
＞0.05，高压氧7d组的凋亡指数明显高于对照组。有显著性差异（P＜0.01）见表1。
表1 高压氧对正常鼠肝细胞凋亡的影响（）
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时间（d）
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n（只）
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高压氧组
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对照组
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3
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6
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0.0195±0.009
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0.018±0.0097*
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7
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6
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0.1007±0.023
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0.015±0.0065**
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*P＞0.05 **P＜0.01
细胞凋亡的影响因素很多，有研究表明，氧自由基的增多对细胞凋亡有促进作用[1]。正常肝细胞的凋亡率为0.02～0.05％。大鼠在接受3d高压氧，肝细胞凋亡未见增加，而经7d处置凋亡细胞明显增多，其机理随着高压氧次数的增多，体内氧自由基水平不断升高，氧自由基使肝细胞膜脂质过氧化，从而造成肝细胞调亡。因此，高压氧能导致正常肝细胞的凋亡在进行高压氧治疗时应予以注意。
参考文献
1．滕霞。细胞凋亡和氧自由基。中华劳动卫生职业病杂志。1997；6，15（3）：190-192。
2．Kam
I, et al. Evidence that host size determines liver size:
Studies in doge receiving orthotopic liver trandplants.
Hepatology. 1987;7:362-366.
3．高春锦，实用高压氧学。学苑出版社1997：46。
